PRDM15 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404932-ACT

PRDM15 (domínio PR/SET 15) codifica um regulador nuclear associado à cromatina, implicado no controle transcricional por meio da modulação de estados da cromatina e da atividade de promotores. Como membro da família PRDM, o PRDM15 está ligado a programas de especificação de linhagem e à manutenção da identidade celular ao coordenar redes de expressão gênica que influenciam proliferação e diferenciação. A regulação dependente de PRDM15 se cruza com vias epigenéticas que moldam circuitos transcricionais do desenvolvimento e pode impactar programas metabólicos e de sinalização. A expressão ou atividade desregulada de PRDM15 tem sido associada a uma homeostase transcricional alterada em contextos relevantes para o câncer, motivando seu estudo em transcrição oncogênica, estados do tipo-tronco e mapeamento de vulnerabilidades epigenéticas.

PRDM15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRDM15 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRDM15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRDM15 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRDM15, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRDM15. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRDM15 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRDM15 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRDM15 em células tumorais com expressão de PRDM15 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.