Plasmide CRISPR d'Activation (h) PRDM11: sc-417861-ACT

PRDM11 code une protéine à doigts de zinc contenant un domaine PR/SET, impliquée dans la régulation de la transcription associée à la chromatine et dans des programmes d’expression génique spécifiques de lignée. En tant que membre de la famille PRDM, PRDM11 est liée à des mécanismes de contrôle épigénétique qui coordonnent les transitions d’état cellulaire, notamment la différenciation et le maintien de l’identité cellulaire. La dérégulation des régulateurs transcriptionnels de la famille PRDM a été associée à des voies de développement altérées et à des réseaux d’expression génique aberrants dans le cancer et d’autres pathologies, ce qui motive l’étude des circuits transcriptionnels dépendants de PRDM11. L’étude de la fonction de PRDM11 soutient des travaux mécanistiques sur le remodelage de la chromatine, le recrutement de facteurs de transcription et le contrôle, dépendant du contexte, des gènes cibles en aval.

PRDM11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PRDM11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PRDM11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PRDM11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PRDM11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PRDM11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PRDM11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PRDM11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PRDM11 dans les cellules tumorales présentant une expression de PRDM11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.