PRA1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404295-ACT

O gene humano **RABAC1** codifica a **PRA1**, um aceitador de Rab prenilado que atua como regulador do tráfego de GTPases Rab e da dinâmica de membranas. A PRA1 participa do transporte endomembranar ao modular a localização e o ciclo das Rabs, influenciando o tráfego entre o RE e o Golgi, a ancoragem de vesículas e a triagem de cargas ao longo de rotas secretoras e endocíticas. Por meio dessas funções, o RABAC1 se conecta à proteostase e às respostas ao estresse celular que dependem de um transporte vesicular coordenado. A desregulação do tráfego mediado por Rab e do controle da via secretora é frequentemente implicada em fenótipos relevantes para a biologia de células cancerosas e para a pesquisa em neurodegeneração, tornando a PRA1 um ponto útil para estudos mecanísticos.

PRA1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RABAC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRA1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RABAC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RABAC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRA1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RABAC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRA1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRA1 em células tumorais com expressão de RABAC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.