PQLC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-413347

概要

PQLC1はリソソーム膜トランスポーターをコードしており、リソソーム内腔から細胞質へカチオン性アミノ酸を排出（エフラックス）する過程に関与すると考えられています。これにより、リソソームにおけるアミノ酸リサイクルが、より広範な細胞代謝の恒常性維持と結びつきます。リソソーム依存的な栄養感知や塩基性アミノ酸のリソソームからの輸送に影響を与えることで、PQLC1はオートファジー、プロテオスタシス、ストレス適応に関連する経路を調節し得ます。リソソーム輸送やアミノ酸制御の異常は、神経変性、がん代謝、遺伝性のリソソーム関連疾患で繰り返し見られる特徴であるため、PQLC1は機序解明研究に有用な結節点となります。PQLC1の機能を撹乱することで、リソソームの溶質輸送が栄養状態に応答するシグナル伝達ネットワークとどのように接続しているかを解析できます。

PQLC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPQLC1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PQLC1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PQLC1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PQLC1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PQLC1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PQLC1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PQLC1の機能に不可欠なPQLC1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PQLC1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PQLC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPQLC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PQLC1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PQLC1 HDRプラスミド（h）および PQLC1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPQLC1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPQLC1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。