Plasmide CRISPR/Cas9 KO PPPDE2 (h): sc-406172
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- PPPDE2 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique PPPDE2, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PPPDE2 Antibody (A-6): sc-393863
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO PPPDE2 (h) | sc-406172 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
PPPDE2 (également annoté DESI1) code une protéine de type protéase/déubiquitinase dépendante de la cystéine, impliquée dans la régulation post-traductionnelle de la stabilité des protéines et de la signalisation. Les activités rapportées incluent la déSUMOylation ou le traitement de modificateurs de type ubiquitine, reliant PPPDE2 à la protéostasie, aux réponses au stress et au contrôle dynamique des fonctions protéiques nucléaires et cytosoliques. Par ces mécanismes, PPPDE2 peut influencer des voies régissant la progression du cycle cellulaire, l’apoptose et des programmes transcriptionnels dépendant de modifications protéiques réversibles. Une expression altérée ou un renouvellement dérégulé de ces modificateurs a été associé à des phénotypes cellulaires pertinents pour la biologie du cancer et les processus neurodégénératifs, ce qui justifie son étude dans des systèmes modèles pertinents pour les maladies.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PPPDE2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DESI1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DESI1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DESI1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PPPDE2.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DESI1 pour l'étude de la signalisation de PPPDE2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de DESI1 essentiels à la fonction de PPPDE2
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DESI1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le PPPDE2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PPPDE2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DESI1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le PPPDE2 plasmide HDR (h) et le PPPDE2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DESI1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DESI1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.