PPOX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422376

Übersicht

Mouse Ppox kodiert die Protoporphyrinogen-Oxidase (PPOX), ein Enzym der inneren Mitochondrienmembran, das in den letzten Schritten der Hämbiosynthese die Oxidation von Protoporphyrinogen IX zu Protoporphyrin IX katalysiert. Indem PPOX den Fluss durch den Porphyrinweg steuert, unterstützt es die Bildung von Hämoproteinen, die für die oxidative Phosphorylierung, die Funktion von Cytochromen und die zelluläre Redoxhomöostase erforderlich sind. Eine Störung der PPOX-Aktivität kann den mitochondrialen Stoffwechsel beeinträchtigen und Porphyrin-Zwischenprodukte anreichern lassen, wodurch dieser Knotenpunkt des Hämstoffwechsels mit fotosensitivitätsassoziierten Porphyrien und breiteren Phänotypen oxidativen Stresses verknüpft ist. Ppox ist daher relevant für die Untersuchung der mitochondrialen Bioenergetik, erythroider Differenzierungsprogramme sowie des metabolischen Crosstalks zwischen Hämverfügbarkeit und dem Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies.

Das PPOX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ppox-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ppox-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ppox nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PPOX-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ppox-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PPOX-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ppox-Exone abzielen, die für die PPOX-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ppox-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PPOX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PPOX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ppox-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PPOX HDR-Plasmid (m) und PPOX HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ppox-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ppox-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.