Plasmide CRISPR d'Activation (m) PPARγ: sc-422363-ACT

Le gène murin *Pparg* code le récepteur activé par les proliférateurs de peroxysomes gamma (PPARγ), un récepteur nucléaire activé par un ligand qui agit comme régulateur transcriptionnel de la gestion des lipides, de la différenciation des adipocytes et de l’homéostasie glucidique. PPARγ intègre des signaux métaboliques pour contrôler des programmes géniques impliqués dans la captation et le stockage des acides gras, la signalisation des adipokines, la fonction mitochondriale et le niveau basal d’inflammation, via des interactions croisées avec les voies associées à l’insuline/PI3K-AKT, à l’AMPK et à NF-κB. Une activité de *Pparg* altérée est largement utilisée comme point d’entrée mécanistique pour étudier la dérégulation métabolique, le remodelage du tissu adipeux et les phénotypes inflammatoires dans des systèmes cellulaires murins.

PPARγ Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Pparg sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PPARγ Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Pparg dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Pparg, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PPARγ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Pparg natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PPARγ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PPARγ dans les cellules tumorales présentant une expression de Pparg silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.