PP2B-B2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422387

Descripción general

Ppp3r2 codifica la subunidad reguladora B2 de la calcineurina (PP2B), una fosfatasa de serina/treonina dependiente de Ca2+/calmodulina que ajusta la amplitud de la señal y la especificidad por sustratos en respuesta a los flujos intracelulares de calcio. PP2B-B2 participa en programas de desfosforilación impulsados por Ca2+ que controlan salidas transcripcionales como la señalización de NFAT, así como la plasticidad sináptica, la remodelación del citoesqueleto y otros procesos sensibles al calcio. Al modular los estados de fosforilación en múltiples dianas, PPP3R2 influye en la adaptación celular a la estimulación tanto en tejidos excitables como no excitables. La desregulación de la señalización de la calcineurina se ha implicado en vías inmunitarias e inflamatorias y en fenotipos neurológicos vinculados a una homeostasis del calcio alterada, lo que convierte a PPP3R2 en un nodo útil para estudios mecanísticos de estos procesos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PP2B-B2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ppp3r2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ppp3r2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ppp3r2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PP2B-B2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ppp3r2 para la investigación de la señalización de PP2B-B2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ppp3r2 críticos para la función de PP2B-B2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ppp3r2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PP2B-B2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PP2B-B2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ppp3r2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PP2B-B2 (m) y el plásmido HDR PP2B-B2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ppp3r2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ppp3r2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.