Plasmide CRISPR d'Activation (h) Pontin 52: sc-402304-ACT

Le gène humain **RUVBL1** code **Pontin 52**, une ATPase AAA+ qui agit au sein d’assemblages multiprotéiques régulant l’architecture de la chromatine, le contrôle transcriptionnel et la biogenèse de complexes macromoléculaires. Pontin 52 est un composant central du complexe co-chaperon **R2TP** et soutient la maturation, dépendante de **HSP90**, de plusieurs complexes clients, ce qui l’associe à des processus tels que les réponses aux dommages de l’ADN, le remodelage de la chromatine et l’assemblage des ribonucléoprotéines. Par ses interactions avec des régulateurs transcriptionnels et des facteurs de remodelage, **RUVBL1** influence la progression du cycle cellulaire et des programmes d’expression génique d’adaptation au stress. Une activité dérégulée de RUVBL1/Pontin 52 et des altérations de son expression ont été associées à des signaux prolifératifs et à des défauts de maintien du génome, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques des voies liées au cancer et des réseaux de protéostasie.

Pontin 52 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RUVBL1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Pontin 52 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RUVBL1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RUVBL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Pontin 52. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RUVBL1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Pontin 52 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Pontin 52 dans les cellules tumorales présentant une expression de RUVBL1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.