Plasmide CRISPR d'Activation (h) POMT2: sc-409912-ACT

POMT2 (protéine O-mannosyltransférase 2) est une glycosyltransférase résidente du réticulum endoplasmique qui, avec POMT1, catalyse la première étape de l’O‑mannosylation des protéines. Cette modification est essentielle à la maturation et à la fonction de nombreuses glycoprotéines membranaires et sécrétées, en particulier l’α‑dystroglycane, influençant ainsi les interactions avec la matrice extracellulaire, l’intégrité de la membrane basale, ainsi que le développement musculaire et neuronal. L’activité de POMT2 s’intègre aux processus de contrôle qualité de la glycosylation et de la voie sécrétoire qui façonnent l’adhérence cellulaire, la migration et l’architecture tissulaire. Une altération de la fonction de POMT2 est associée aux dystroglycanopathies et à des phénotypes neuromusculaires et neurodéveloppementaux apparentés, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques sur le processing des glycoprotéines et la signalisation dépendante du dystroglycane.

POMT2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de POMT2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

POMT2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus POMT2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription POMT2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de POMT2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus POMT2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de POMT2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie POMT2 dans les cellules tumorales présentant une expression de POMT2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.