POMC Plasmide KO CRISPR/Cas9 (r): sc-437377

Panoramica

La proopiomelanocortina (POMC) è un pro-ormone neuroendocrino precursore che viene processato proteoliticamente in molteplici peptidi bioattivi, tra cui ACTH e le melanocortine, che coordinano la segnalazione dell’asse dello stress, il bilancio energetico, la pigmentazione e la nocicezione. Nei circuiti ipotalamici e ipofisari del ratto, i peptidi derivati da POMC agiscono attraverso i recettori delle melanocortine e integrano segnali nutrizionali e ormonali per regolare il comportamento alimentare e l’omeostasi metabolica. L’espressione di POMC è strettamente controllata da programmi trascrizionali dello sviluppo e responsivi agli stimoli, e un’alterata maturazione o segnalazione di POMC è implicata in fenotipi associati all’obesità, risposte disregolate dell’asse HPA e disfunzioni endocrine. In quanto nodo centrale nella biosintesi di neuropeptidi e nella segnalazione mediata da GPCR, POMC è ampiamente utilizzata per studiare l’identità delle cellule neuroendocrine, la maturazione dei peptidi e la fisiologia sistemica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO POMC (r) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene in linee cellulari rat. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina POMC.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di per lo studio della segnalazione di POMC, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni critici per la funzione di POMC
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal POMC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r) e dal POMC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus . Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal POMC Plasmide HDR (r) e il plasmide HDR POMC (r2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.