Plasmide CRISPR d'Activation (h) PMS1: sc-418473-ACT

Le gène humain **PMS1** code un homologue de MutL qui participe à la réparation des mésappariements de l’ADN, en soutenant la fidélité de la réplication par la coordination de la reconnaissance et du traitement des mésappariements base–base et des boucles d’insertion–délétion. PMS1 fonctionne au sein du réseau de complexes MutL pour coupler la reconnaissance des mésappariements à l’excision et à la resynthèse en aval, contribuant ainsi à la stabilité du génome et à la suppression de la mutagenèse spontanée. Des défauts ou une régulation altérée des gènes de réparation des mésappariements peuvent augmenter l’instabilité des microsatellites et accroître l’accumulation de mutations, des processus largement pertinents pour la carcinogenèse et les réponses cellulaires au stress. PMS1 est donc étudié dans les voies impliquées dans la signalisation des dommages à l’ADN, la réparation associée à la réplication et le maintien de l’intégrité chromosomique.

PMS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PMS1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PMS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PMS1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PMS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PMS1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PMS1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PMS1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PMS1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PMS1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.