PMPCB Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405207

Panoramica

PMPCB codifica la subunità beta della peptidasi di processamento mitocondriale, un componente centrale del complesso MPP eterodimerico che scinde le presequesnze di targeting N-terminali dalle proteine codificate dal nucleo dopo la loro importazione nella matrice mitocondriale. Consentendo la maturazione degli enzimi della fosforilazione ossidativa e del metabolismo, PMPCB sostiene la proteostasi mitocondriale, l’omeostasi bioenergetica e le risposte allo stress legate al controllo di qualità dei mitocondri. L’alterazione del processamento delle presequesnze mitocondriali può compromettere la funzione della catena respiratoria, aumentare lo stress proteotossico e modificare la segnalazione dell’apoptosi e della mitofagia. La disfunzione di PMPCB e un processamento mitocondriale delle proteine perturbato sono stati associati a fenotipi neuroevolutivi e a meccanismi di malattia mitocondriale, rendendolo rilevante per studi sul metabolismo energetico e sulla disfunzione degli organelli.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PMPCB (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PMPCB in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PMPCB insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PMPCB a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PMPCB.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PMPCB per lo studio della segnalazione di PMPCB, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PMPCB critici per la funzione di PMPCB
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PMPCB per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PMPCB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PMPCB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PMPCB. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PMPCB Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PMPCB (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PMPCB per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PMPCB definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.