Plasmide CRISPR/Cas9 KO PMPCB (h): sc-405207

Présentation

PMPCB code la sous-unité bêta de la peptidase de maturation mitochondriale (mitochondrial processing peptidase, MPP), un composant central du complexe MPP hétérodimérique qui clive les préséquences de ciblage N-terminales des protéines codées par le noyau après leur importation dans la matrice mitochondriale. En permettant la maturation des enzymes de la phosphorylation oxydative et du métabolisme, PMPCB soutient la protéostase mitochondriale, l’homéostasie bioénergétique et les réponses au stress liées au contrôle qualité mitochondrial. Une perturbation du traitement des préséquences mitochondriales peut altérer la fonction de la chaîne respiratoire, augmenter le stress protéotoxique et modifier la signalisation de l’apoptose et de la mitophagie. Des dysfonctionnements de PMPCB et un traitement mitochondrial des protéines perturbé ont été associés à des phénotypes neurodéveloppementaux et à des mécanismes de maladies mitochondriales, ce qui en fait une cible pertinente pour des études sur le métabolisme énergétique et le dysfonctionnement des organites.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PMPCB (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PMPCB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PMPCB, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PMPCB à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PMPCB.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PMPCB pour l'étude de la signalisation de PMPCB, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PMPCB essentiels à la fonction de PMPCB
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PMPCB pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PMPCB plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PMPCB plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PMPCB. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PMPCB plasmide HDR (h) et le PMPCB (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PMPCB pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PMPCB définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.