Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PMM2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406428
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PMM2 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PMM2, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PMM2 Anticuerpo (2A5): sc-517179
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PMM2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406428 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PMM2 codifica la fosfomanomutasa 2, una enzima citosólica que interconvierte manosa-6-fosfato y manosa-1-fosfato para favorecer la producción de GDP-manosa y la glicosilación N‑ligada. A través de su papel en la biosíntesis de precursores de glicanos, PMM2 influye en el plegamiento de proteínas, el control de calidad, la secreción y las interacciones con la matriz extracelular en múltiples tipos celulares. La disminución de la actividad de PMM2 se asocia a trastornos congénitos de la glicosilación, en los que la maduración deficiente de las glucoproteínas altera la señalización, el tráfico intracelular y el desarrollo de órganos. En modelos basados en células, la función de PMM2 se estudia con frecuencia para desentrañar la proteostasis dependiente de la glicosilación y las vías de respuesta al estrés, incluida la homeostasis del retículo endoplásmico (RE).
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PMM2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PMM2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PMM2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PMM2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PMM2.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PMM2 para la investigación de la señalización de PMM2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PMM2 críticos para la función de PMM2
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PMM2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PMM2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PMM2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PMM2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PMM2 (h) y el plásmido HDR PMM2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PMM2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PMM2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.