Plasmide Double Nickase (h) PLUNC: sc-416774-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PLUNC correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PLUNC Double Nickase (h) et le plasmide PLUNC Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant BPIFA1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PLUNC Antibody (A-11): sc-271457
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PLUNC | sc-416774-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PLUNC | sc-416774-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BPIFA1 code la protéine humaine PLUNC, un membre sécrété de la famille des protéines à domaine de type « pli BPI », particulièrement abondant dans l’épithélium des voies aériennes supérieures et du nasopharynx. PLUNC contribue à la défense innée des muqueuses en modulant l’homéostasie du liquide de surface des voies aériennes, en influençant la fonction de barrière épithéliale et en interagissant avec des composants microbiens qui orientent la signalisation inflammatoire locale. L’expression de BPIFA1 répond à la différenciation épithéliale et aux signaux inflammatoires, ce qui la relie à des processus tels que les interactions hôte–pathogène, la clairance mucociliaire et la régulation du microenvironnement des voies aériennes. Des modifications de l’abondance de BPIFA1/PLUNC ont été rapportées dans des contextes d’inflammation respiratoire et la protéine est fréquemment étudiée en lien avec les mécanismes des maladies chroniques des voies aériennes et le remodelage épithélial.
PLUNC Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BPIFA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BPIFA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BPIFA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BPIFA1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.