plexin-C1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403944-ACT

PLXNC1 kodiert Plexin‑C1, einen transmembranen Rezeptor für Semaphorin‑Liganden, der kontaktabhängige Signalübertragung, zytoskelettales Remodeling und gerichtete Zellbewegung reguliert. Plexin‑C1 ist an Semaphorin/Plexin‑Signalwegen beteiligt, die extrazelluläre Leitsignale mit der Aktivität von Rho‑Familien‑GTPasen im Zellinneren koppeln und dadurch Adhäsionsdynamik, das Verhalten von Immunzellen und die Gewebemusterbildung beeinflussen. Eine veränderte PLXNC1‑Expression wurde in verschiedenen Kontexten beschrieben, in denen Migration und Interaktionen mit der Mikroumgebung fehlreguliert sind, was seinen Nutzen als mechanistischen Knotenpunkt in Studien zu Invasion, Entzündung und stromal‑immunem Crosstalk unterstreicht. Als humaner Rezeptor mit pleiotropen Signalausgängen wird Plexin‑C1 häufig in Signalwegen untersucht, die rezeptorvermittelte Leitsignalgebung mit transkriptioneller und phänotypischer Reprogrammierung verknüpfen.

plexin-C1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PLXNC1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

plexin-C1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PLXNC1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PLXNC1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen plexin-C1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PLXNC1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von plexin-C1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des plexin-C1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PLXNC1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.