plexin-B2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-431226-ACT

O gene Plxnb2 do camundongo codifica a plexina-B2, um receptor transmembrana de semaforinas que medeia sinalização dependente de contato para regular a remodelagem do citoesqueleto, a migração celular e a orientação axonal. A plexina-B2 aciona vias de pequenas GTPases, incluindo a sinalização da família Rho, para coordenar a dinâmica de actina, o crescimento de neuritos e o padrão de organização dos tecidos durante o desenvolvimento. Além de suas funções no estabelecimento de conexões neurais, a atividade de Plxnb2 tem sido associada à morfogênese epitelial e a comportamentos celulares invasivos que se cruzam com programas de sinalização relevantes para o desenvolvimento e para o câncer. Assim, modular a expressão de plexina-B2 é útil para dissecar redes de sinalização semaforina–plexina e seus efeitos sobre polaridade celular, motilidade e diferenciação em sistemas modelo de camundongo.

plexin-B2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Plxnb2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

plexin-B2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Plxnb2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Plxnb2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de plexin-B2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Plxnb2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de plexin-B2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via plexin-B2 em células tumorais com expressão de Plxnb2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.