Plasmide CRISPR d'Activation (h) plexin-A1: sc-403043-ACT

Le gène humain **PLXNA1** code la plexine-A1, un récepteur transmembranaire qui se lie aux sémaphorines de classe 3 en partenariat avec les neuropilines afin de réguler des signaux de guidage contrôlant le remodelage du cytosquelette, l’adhésion et la migration cellulaire directionnelle. La signalisation de la plexine-A1 s’interface avec les GTPases de la famille Rho et des réseaux de kinases en aval pour coordonner le guidage axonal, l’organisation dendritique et le trafic des cellules immunitaires. Dans des contextes non neuronaux, **PLXNA1** contribue à l’organisation des tissus ainsi qu’aux interactions vasculaires et stromales en modulant la motilité et les réponses dépendantes du contact. Une dérégulation de la signalisation sémaphorine–plexine impliquant **PLXNA1** a été associée à des altérations des processus neurodéveloppementaux et des comportements du microenvironnement tumoral, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques des voies de guidage et de migration.

plexin-A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PLXNA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

plexin-A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PLXNA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PLXNA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de plexin-A1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PLXNA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de plexin-A1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie plexin-A1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PLXNA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.