Plectin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401494-ACT

Il gene umano **PLEC** codifica la plectina, una grande proteina citolinker che integra i filamenti intermedi con i microfilamenti di actina e i microtubuli per stabilizzare l’architettura cellulare sotto stress meccanico. Ancorando le reti del citoscheletro a complessi associati alla membrana come emidesmosomi e adesioni focali, la plectina supporta l’adesione cellula–matrice, la meccanotrasduzione e il rimodellamento dinamico durante migrazione e differenziamento. L’organizzazione dei sistemi filamentosi dipendente dalla plectina influenza nodi di segnalazione legati all’integrità cellulare e alle risposte allo stress, incluse vie che regolano la resilienza dell’epitelio e la stabilità delle miofibre. Alterazioni della funzione o dell’espressione di **PLEC** sono state associate a fenotipi di fragilità tissutale e a patologie neuromuscolari ed epiteliali, rendendolo rilevante per studi sul cross-talk del citoscheletro e sul mantenimento della barriera.

Plectin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PLEC senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Plectin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PLEC nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PLEC, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Plectin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PLEC nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Plectin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Plectin nelle cellule tumorali con espressione di PLEC silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.