Plasmide CRISPR/Cas9 KO PLC η2 (h): sc-409214

Présentation

PLCH2 code la phospholipase C êta 2 (PLC η2), une enzyme spécifique des phosphoinositides qui hydrolyse le PIP2 pour générer de l’IP3 et du diacylglycérol, couplant ainsi la signalisation lipidique membranaire à la mobilisation intracellulaire de Ca2+ et à l’activation de la protéine kinase C. En tant que modulateur du renouvellement des phosphoinositides, la PLC η2 contribue au contrôle Ca2+-dépendant de la transduction du signal, du remodelage du cytosquelette et du trafic vésiculaire dans les cellules humaines. Une signalisation lipidique altérée liée aux PLC est largement impliquée dans des dérégulations de la prolifération, de la différenciation et des réponses au stress, ce qui fait de PLCH2 un nœud utile pour étudier le recâblage des voies dans des phénotypes cellulaires associés aux maladies. L’étude de la PLC η2 peut aider à élucider comment la dynamique PIP2/IP3/DAG façonne les programmes transcriptionnels en aval et les réseaux d’effecteurs dépendants du calcium.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PLC η2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PLCH2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PLCH2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PLCH2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PLC η2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PLCH2 pour l'étude de la signalisation de PLC η2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PLCH2 essentiels à la fonction de PLC η2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PLCH2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PLC η2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PLC η2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PLCH2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PLC η2 plasmide HDR (h) et le PLC η2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PLCH2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PLCH2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.