Plasmide CRISPR d'Activation (h) PLC β2: sc-400984-ACT

Le gène humain **PLCB2** code la phospholipase C bêta 2 (PLCβ2), une phospholipase spécifique des phosphoinositides qui couple la signalisation des GPCR activés à la production de seconds messagers. PLCβ2 hydrolyse le PIP2 pour générer l’IP3 et le DAG, favorisant la mobilisation du Ca2+ intracellulaire et l’activation de la PKC, qui régulent la chimiotaxie, la dégranulation, la production de cytokines et d’autres fonctions effectrices. Cette voie s’intègre aux signalisations PI3K, MAPK et des petites GTPases pour façonner le remodelage du cytosquelette et les programmes transcriptionnels, en particulier dans les contextes hématopoïétiques et des cellules immunitaires. Une activité dérégulée de PLCB2 et une signalisation dépendante du Ca2+ ont été associées à des réponses inflammatoires altérées et à des réseaux de signalisation oncogéniques, ce qui soutient son intérêt comme nœud mécanistique pour l’exploration des voies de signalisation.

PLC β2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PLCB2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PLC β2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PLCB2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PLCB2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PLC β2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PLCB2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PLC β2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PLC β2 dans les cellules tumorales présentant une expression de PLCB2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.