PKC epsilon CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422261

Übersicht

Prkce kodiert die Protein-Kinase C Epsilon (PKCε), eine diacylglycerol-responsive Serin/Threonin-Kinase, die Signale aus Phospholipiden und rezeptorvermittelten Signalwegen integriert und so das Zellverhalten mitprägt. PKCε moduliert Phosphorylierungsnetzwerke, die das Remodeling des Zytoskeletts, den Vesikeltransport und Programme des Zellüberlebens steuern, und wird in vielen Zelltypen häufig mit Signaloutputs der MAPK/ERK- sowie der PI3K–AKT-Signalwege in Verbindung gebracht. In Mausmodellen wird die Prkce-Aktivität im Kontext von Stressantworten, inflammatorischer Signalgebung und Gewebeumbau untersucht, wobei eine veränderte PKCε-Signalgebung Phänotypen beeinflussen kann, die für die Stoffwechsel- und kardiovaskuläre Biologie ebenso wie für tumorassoziierte Prozesse relevant sind. Diese funktionellen Verknüpfungen machen Prkce zu einem nützlichen Knotenpunkt, um Kinase-getriebenes Pathway-Cross-Talk und signalabhängige zelluläre Plastizität zu analysieren.

Das PKC epsilon CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Prkce-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Prkce-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Prkce nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PKC epsilon-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Prkce-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PKC epsilon-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Prkce-Exone abzielen, die für die PKC epsilon-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Prkce-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PKC epsilon CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PKC epsilon CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Prkce-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PKC epsilon HDR-Plasmid (m) und PKC epsilon HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Prkce-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Prkce-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.