Plasmide CRISPR d'Activation (h) PKC delta: sc-400287-ACT

PRKCD code la protéine kinase C delta (PKCδ), une kinase sérine/thréonine sensible au diacylglycérol, qui couple les signaux induits par les récepteurs à des programmes de phosphorylation en aval contrôlant la prolifération, la différenciation, l’apoptose et le remodelage du cytosquelette. PKCδ participe aux interactions entre les voies PKC/MAPK et PI3K–AKT, module la signalisation inflammatoire dépendante de NF‑κB et régule les réponses aux dommages de l’ADN via la phosphorylation d’effecteurs du stress et des points de contrôle. Dans les cellules immunitaires et hématopoïétiques, PRKCD contribue à ajuster la signalisation du récepteur des lymphocytes B et la tolérance, tandis que dans des contextes épithéliaux, il influence l’adhérence et le comportement migratoire. Une activité ou une expression dérégulée de PRKCD a été associée à des seuils d’apoptose modifiés, à des phénotypes inflammatoires et à un remodelage oncogénique des voies de signalisation, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques centrées sur les voies.

PKC delta Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PRKCD sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PKC delta Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PRKCD dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PRKCD, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PKC delta. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PRKCD natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PKC delta au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PKC delta dans les cellules tumorales présentant une expression de PRKCD silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.