Plasmide Double Nickase (m) Pim-1: sc-422237-NIC

Le gène murin **Pim1** code la sérine/thréonine kinase **Pim-1**, une enzyme de signalisation constitutivement active qui module la survie cellulaire, la prolifération et l’adaptation métabolique. Pim-1 phosphoryle des substrats impliqués dans le contrôle du cycle cellulaire et l’apoptose, notamment des régulateurs de la traduction et des réponses au stress, et elle coopère avec les voies de signalisation des facteurs de croissance et des cytokines pour façonner la fonction des cellules hématopoïétiques et immunitaires. En tant qu’effecteur en aval fréquemment associé à des programmes transcriptionnels oncogéniques, Pim-1 est étudiée dans des voies qui convergent vers l’activité de MYC, la synthèse protéique dépendante de mTOR et la résistance au stress cellulaire. Une activité Pim1/Pim-1 dérégulée a été associée à la transformation maligne et à la progression tumorale dans de multiples systèmes modèles, ce qui en fait une cible courante pour des études mécanistiques de la signalisation des kinases et de l’oncogenèse.

Pim-1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Pim1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Pim1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Pim1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Pim1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.