Plasmide Double Nickase (h) Pim-1: sc-400376-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Pim-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Pim-1 Double Nickase (h) et le plasmide Pim-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PIM1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Pim-1 Antibody (G-11): sc-374116
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Pim-1 | sc-400376-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Pim-1 | sc-400376-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **PIM1** code la kinase sérine/thréonine Pim‑1, un régulateur proto‑oncogénique à courte durée de vie de la croissance et de la survie cellulaires. Pim‑1 phosphoryle des substrats qui modulent l’apoptose, la progression du cycle cellulaire et des programmes transcriptionnels, intégrant des signaux issus des cytokines et des facteurs de croissance, et recoupant des voies associées à JAK/STAT, PI3K/AKT et NF‑κB. Une expression ou une activité dérégulée de **PIM1** a été associée à une prolifération aberrante et à une résistance au stress dans de multiples modèles de cancer, et ce gène est fréquemment étudié dans le contexte d’une coopération oncogénique avec **MYC** et d’une signalisation hématopoïétique altérée. Ces propriétés font de Pim‑1 un nœud utile pour disséquer les réseaux de signalisation dépendants des kinases, le contrôle de l’apoptose et le dialogue entre voies dans les cellules humaines.
Pim-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PIM1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PIM1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PIM1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PIM1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.