Plasmide Double Nickase (m) PIG-A: sc-422226-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) PIG-A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PIG-A Double Nickase (m) et le plasmide PIG-A Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Piga. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PIG-A Antibody (H-6): sc-374194
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) PIG-A | sc-422226-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) PIG-A | sc-422226-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin *Piga* code PIG-A, une sous-unité catalytique du complexe glycosylphosphatidylinositol (GPI)-N-acétylglucosaminyltransférase qui initie la biosynthèse des ancres GPI dans le réticulum endoplasmique. En permettant l’attachement d’ancres GPI, PIG-A favorise la présentation à la surface cellulaire de diverses protéines ancrées au GPI, impliquées dans l’organisation membranaire, la transduction du signal, les interactions cellule–cellule et des processus liés à l’immunité. La perturbation de PIG-A dérègle l’assemblage des ancres GPI et peut modifier le trafic et la stabilité des protéines liées au GPI, affectant les voies qui dépendent de récepteurs et d’enzymes ancrés aux lipides. Le dysfonctionnement de PIGA constitue l’anomalie génétique centrale dans l’hémoglobinurie paroxystique nocturne et est également impliqué dans des troubles congénitaux de la glycosylation, faisant de *Piga* un locus utile pour étudier des phénotypes dépendants de la glycosylation et la génétique fondée sur la sélection.
PIG-A Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Piga dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Piga. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Piga. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Piga.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.