Plasmide CRISPR d'Activation (h) PIDD: sc-403439-ACT

PIDD1 code la protéine à domaine de mort induite par p53 (PIDD), un adaptateur cytosolique qui intègre les signaux de stress génotoxique et de stress cellulaire au sein des réseaux de signalisation apoptotiques et inflammatoires. PIDD participe à l’assemblage de complexes multiprotéiques tels que le PIDDosome, influençant l’activation de la caspase‑2, les réponses aux dommages de l’ADN et les décisions de destinée cellulaire, notamment l’apoptose et le contrôle des points de contrôle du cycle cellulaire. Grâce à des interactions protéiques médiées par son domaine de mort, PIDD peut moduler des voies liées à NF‑κB et des programmes transcriptionnels sensibles au stress. Une dérégulation de la signalisation PIDD1/PIDD a été étudiée dans le contexte d’une sensibilité modifiée à l’apoptose et de phénotypes d’instabilité génomique pertinents pour la biologie du cancer et d’autres troubles de la signalisation du stress.

PIDD Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PIDD1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PIDD Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PIDD1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PIDD1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PIDD. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PIDD1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PIDD au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PIDD dans les cellules tumorales présentant une expression de PIDD1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.