PI-9 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-423120-LAC

O Serpinb9 de camundongo codifica o PI-9, uma serpina intracelular que inibe a granzima B e proteases citotóxicas relacionadas, regulando assim a apoptose mediada por grânulos e limitando danos não intencionais autoinfligidos em células imunes. Ao modular a atividade de proteases a jusante da degranulação de linfócitos citotóxicos, o PI-9 influencia programas de morte celular dependentes de caspases, a homeostase imune e a remodelação tecidual inflamatória. A expressão de Serpinb9 é estudada em contextos de privilégio imunológico, respostas de células T induzidas por antígeno e sinalização de estresse regulada por citocinas. A atividade desregulada de PI-9 tem sido associada a suscetibilidade alterada a lesão mediada pelo sistema imune e a fenótipos de evasão imune em modelos relevantes para doenças, sustentando seu uso como um nó mecanístico em pesquisas sobre apoptose e vigilância imune.

As Partículas de Ativação Lentivirais PI-9 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Serpinb9 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais PI-9 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Serpinb9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de PI-9. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Serpinb9 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.