Particules Lentivirales d'Activation (m) PI-9: sc-423120-LAC

Le gène murin Serpinb9 code PI-9, une serpine intracellulaire qui inhibe la granzyme B et des protéases cytotoxiques apparentées, régulant ainsi l’apoptose médiée par les granules et limitant les dommages involontaires auto-infligés dans les cellules immunitaires. En modulant l’activité des protéases en aval de la dégranulation des lymphocytes cytotoxiques, PI-9 influence les programmes de mort cellulaire dépendants des caspases, l’homéostasie immunitaire et le remodelage tissulaire inflammatoire. L’expression de Serpinb9 est étudiée dans des contextes de privilège immunitaire, de réponses des cellules T induites par l’antigène et de signalisation de stress régulée par les cytokines. Une activité dérégulée de PI-9 a été associée à une susceptibilité modifiée aux lésions d’origine immunitaire et à des phénotypes d’échappement immunitaire dans des modèles pertinents pour les maladies, ce qui soutient son utilisation comme nœud mécanistique dans la recherche sur l’apoptose et la surveillance immunitaire.

Les particules d'activation lentivirales PI-9 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Serpinb9 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PI-9 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Serpinb9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PI-9. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Serpinb9 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.