Plasmide CRISPR d'Activation (m) PI-9: sc-423120-ACT

Le gène murin **Serpinb9** code **PI-9**, un inhibiteur intracellulaire de sérine protéase qui limite l’activité de la granzyme B afin de moduler la fonction effectrice des lymphocytes cytotoxiques et d’empêcher l’apoptose induite par des protéases dans les cellules présentatrices d’antigène et les cellules immuno-privilégiées. En tamponnant les événements de clivage médiés par la granzyme B, PI-9 contribue à la régulation de l’activation des caspases, à la survie des cellules inflammatoires et à l’homéostasie immunitaire lors des interactions cytotoxiques cellule à cellule. L’expression de **Serpinb9** est associée à des mécanismes d’échappement immunitaire et de persistance dans des microenvironnements inflammatoires, ce qui la rend pertinente pour les études en immunobiologie tumorale, auto-immunité et biologie de la transplantation. Sa régulation inductible est également liée à des programmes transcriptionnels sensibles au stress et aux cytokines, qui façonnent la différenciation des cellules immunitaires et la tolérance immunitaire spécifique des tissus.

PI-9 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Serpinb9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PI-9 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Serpinb9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Serpinb9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PI-9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Serpinb9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PI-9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PI-9 dans les cellules tumorales présentant une expression de Serpinb9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.