Plasmide CRISPR/Cas9 KO PI 3-kinase p85β (h): sc-401991

Présentation

PIK3R2 code la sous-unité régulatrice p85β de la phosphoinositide 3‑kinase (PI3K) de classe IA, qui stabilise et module les sous-unités catalytiques p110 et relie les récepteurs à activité tyrosine kinase activés ainsi que les protéines adaptatrices à la signalisation PI3K. En contrôlant la production de PIP3, la PI3‑kinase p85β régit AKT–mTOR et des voies apparentées qui régulent la croissance cellulaire, le métabolisme, la survie et la dynamique du cytosquelette. Les perturbations de la régulation de la voie PI3K sont largement impliquées dans la signalisation oncogénique, les réponses à l’insuline/IGF et la fonction des cellules immunitaires. Comme p85β influence l’activité PI3K à la fois basale et dépendante des stimuli, elle est souvent étudiée dans des contextes de rétrocontrôle de signalisation, de crosstalk entre voies et de remodelage des réseaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PI 3-kinase p85β (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PIK3R2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PIK3R2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PIK3R2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PI 3-kinase p85β.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PIK3R2 pour l'étude de la signalisation de PI 3-kinase p85β, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PIK3R2 essentiels à la fonction de PI 3-kinase p85β
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PIK3R2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PI 3-kinase p85β plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PI 3-kinase p85β plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PIK3R2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PI 3-kinase p85β plasmide HDR (h) et le PI 3-kinase p85β (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PIK3R2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PIK3R2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.