Plasmide CRISPR/Cas9 KO PHF6 (m): sc-427858

Présentation

Le gène murin **Phf6** code la protéine **PHF6**, une protéine nucléaire à doigt de zinc de type PHD qui agit comme régulateur de la transcription et de la biogenèse des ARN associé à la chromatine. PHF6 participe au contrôle épigénétique de l’expression génique via des interactions avec des complexes de remodelage de la chromatine et de modification des histones, influençant des programmes transcriptionnels spécifiques de lignée, la progression du cycle cellulaire et la différenciation. La perturbation des réseaux de régulation dépendants de PHF6 a été associée à des altérations des processus hématopoïétiques et du neurodéveloppement, ce qui fait de **Phf6** un nœud utile pour étudier la dysrégulation transcriptionnelle. Dans les modèles murins, la perturbation de **Phf6** est couramment étudiée dans le contexte de la stabilité du génome, de l’organisation de la chromatine et de signatures d’expression génique pertinentes pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PHF6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Phf6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Phf6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Phf6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PHF6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Phf6 pour l'étude de la signalisation de PHF6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Phf6 essentiels à la fonction de PHF6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Phf6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PHF6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PHF6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Phf6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PHF6 plasmide HDR (m) et le PHF6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Phf6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Phf6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.