Plasmide CRISPR d'Activation (h) PGD2 synthase: sc-402272-ACT

PTGDS code la prostaglandine D2 synthase (synthase de la PGD2), une enzyme qui catalyse la conversion de la PGH2 en prostaglandine D2, un médiateur lipidique bioactif de la voie de l’acide arachidonique/des eicosanoïdes. La signalisation de la PGD2 influence le tonus inflammatoire, les réponses vasculaires et du muscle lisse, la régulation du cycle veille–sommeil et la chimiotaxie des cellules immunitaires via des récepteurs des prostanoïdes en aval et des réseaux lipidiques apparentés. L’expression de PTGDS est marquée dans des tissus tels que le cerveau et les méninges et peut moduler l’équilibre local des prostaglandines, lequel façonne des processus neuro-inflammatoires et associés aux barrières. Une production de prostaglandines dérégulée et les voies associées à PTGDS sont étudiées dans des contextes incluant l’inflammation allergique, la neuroinflammation et la biologie du microenvironnement tumoral, où les médiateurs lipidiques influencent l’état cellulaire et la signalisation intercellulaire.

PGD2 synthase Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PTGDS sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PGD2 synthase Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PTGDS dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PTGDS, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PGD2 synthase. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PTGDS natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PGD2 synthase au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PGD2 synthase dans les cellules tumorales présentant une expression de PTGDS silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.