Plasmide CRISPR d'Activation (h) PGAM5: sc-401300-ACT

PGAM5 (membre 5 de la famille des phosphoglycérate mutases) est une phosphatase atypique sérine/thréonine mitochondriale, ancrée à la membrane externe de la mitochondrie, qui relie le contrôle qualité mitochondrial aux voies de signalisation du stress. Elle module la dynamique mitochondriale et la mitophagie en régulant des événements dépendants de la phosphorylation sur des substrats impliqués dans l’équilibre fission–fusion, et peut influencer le renouvellement mitochondrial associé à PINK1/Parkin. PGAM5 interagit également avec les signalisations rédox et de mort cellulaire, notamment des voies liées à la nécroptose, façonnant les réponses cellulaires au stress oxydant et aux perturbations métaboliques. Une activité ou une expression dérégulée de PGAM5 a été associée à des phénotypes de dysfonction mitochondriale impliqués dans la neurodégénérescence, les réponses au stress cardiométabolique et la biologie des cancers, via des modifications de la bioénergétique et des programmes d’adaptation au stress.

PGAM5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PGAM5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PGAM5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PGAM5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PGAM5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PGAM5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PGAM5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PGAM5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PGAM5 dans les cellules tumorales présentant une expression de PGAM5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.