Plasmide CRISPR d'Activation (h) Perlecan: sc-400823-ACT

HSPG2 code la perlecan, un grand protéoglycane à héparane sulfate des membranes basales et des matrices péricellulaires, qui organise l’architecture de la matrice extracellulaire et module la biodisponibilité des facteurs de croissance. En se liant au FGF, au VEGF, au PDGF et à d’autres ligands via ses chaînes de glycosaminoglycanes et les domaines de sa protéine cœur, la perlecan influence l’adhésion cellulaire, la mécanotransduction et les voies de signalisation qui régulent la prolifération, la migration et les réponses angiogéniques. La perlecan contribue également à l’homéostasie du cartilage et du système vasculaire en coordonnant les interactions entre les laminines, les collagènes et les intégrines, façonnant ainsi la fonction barrière et la résilience des tissus. Une expression dérégulée de HSPG2 ou une structure altérée de la perlecan est associée à des phénotypes squelettiques du développement, au remodelage du microenvironnement tumoral et à des pathologies vasculaires, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des mécanismes pathologiques dépendants de la MEC.

Perlecan Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HSPG2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Perlecan Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HSPG2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HSPG2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Perlecan. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HSPG2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Perlecan au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Perlecan dans les cellules tumorales présentant une expression de HSPG2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.