Plasmide Double Nickase (h2) Pegasus: sc-406376-NIC-2
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h2) Pegasus correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Pegasus Double Nickase (h2) et le plasmide Pegasus Double Nickase (h22) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant IKZF5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Pegasus Antibody (1B6): sc-517137
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h2) Pegasus | sc-406376-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Chez l’humain, IKZF5 code le facteur de transcription à doigts de zinc Pegasus, membre de la famille Ikaros, qui se lie à l’ADN pour réguler des programmes d’expression génique impliqués dans la différenciation des cellules immunitaires et la stabilité des réseaux transcriptionnels. IKZF5 participe au contrôle de processus associés à la chromatine ainsi que des sorties de signalisation sensibles aux cytokines qui façonnent les états d’activation des lymphocytes et leur engagement de lignée. Une activité ou une expression dérégulée d’IKZF5 a été associée à des phénotypes liés à l’immunité et à une susceptibilité accrue à des mécanismes de maladies inflammatoires et auto-immunes, ce qui confirme sa pertinence en tant que nœud moléculaire dans les études d’immunogénétique. L’édition génomique d’IKZF5 permet d’interroger la fonction des circuits régulateurs dépendants de Pegasus, de cartographier les cibles en aval par des approches transcriptomiques et épigénomiques, et de générer des modèles cellulaires ingénierés pour étudier les perturbations de voies de signalisation en immunologie humaine.
Pegasus Le plasmide double nickase (h2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IKZF5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IKZF5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IKZF5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IKZF5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.