PDLIM5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405340-ACT

PDLIM5 codifica uma proteína adaptadora com domínios PDZ e LIM que se localiza em estruturas associadas à actina e conecta a organização do citoesqueleto à transdução de sinais. Em células humanas, a PDLIM5 participa da regulação da dinâmica da actina, da adesão celular e de vias mecanossensíveis, ao coordenar interações proteína–proteína em fibras de estresse e em complexos semelhantes ao disco Z. Por meio dessas funções, influencia processos como morfologia celular, migração e contratilidade, e se integra a redes de sinalização por quinases que respondem a estímulos do citoesqueleto. Alterações na expressão de PDLIM5 e na atividade de vias relacionadas têm sido estudadas no contexto da biologia de doenças cardiovasculares e neuropsiquiátricas, sustentando sua utilidade como um nó para investigar mecanismos de sinalização acoplados ao citoesqueleto.

PDLIM5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PDLIM5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PDLIM5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PDLIM5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PDLIM5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PDLIM5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PDLIM5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PDLIM5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PDLIM5 em células tumorais com expressão de PDLIM5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.