Plasmide Double Nickase (h) PDK3: sc-404502-NIC

PDK3 code la kinase du pyruvate déshydrogénase isoforme 3, une kinase mitochondriale Ser/Thr qui phosphoryle et inhibe le complexe pyruvate déshydrogénase, limitant ainsi la conversion du pyruvate en acétyl-CoA et détournant le flux de carbone du cycle de l’ATC (TCA). Par ce point de contrôle, PDK3 intègre la disponibilité en nutriments et la signalisation de l’hypoxie à l’oxydation du glucose, à la production de lactate et, plus largement, à la bioénergétique mitochondriale. Une activité dérégulée de PDK3 a été associée à une reprogrammation métabolique pathologique et à une altération de l’équilibre rédox, avec des liens rapportés avec le métabolisme des cellules cancéreuses ainsi qu’avec des troubles neuromusculaires et des atteintes des nerfs périphériques. En tant que régulateur du métabolisme oxydatif, PDK3 est fréquemment étudiée dans des contextes impliquant les réponses au stress mitochondrial, la dépendance à la glycolyse et l’adaptation métabolique.

PDK3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PDK3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PDK3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PDK3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PDK3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.