Plasmide Double Nickase (h) PDK2: sc-416916-NIC

La pyruvate déshydrogénase kinase 2 (PDK2) est une sérine/thréonine kinase mitochondriale qui phosphoryle et inhibe le complexe pyruvate déshydrogénase, limitant ainsi la conversion du pyruvate en acétyl-CoA et détournant le flux de carbone du cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs). En régulant l’équilibre pyruvate–lactate et le métabolisme oxydatif, PDK2 intègre la disponibilité en nutriments à la respiration mitochondriale ainsi qu’à l’homéostasie des lipides et du glucose. L’activité de PDK2 s’inscrit dans la signalisation du stress métabolique et peut influencer la gestion des espèces réactives de l’oxygène et l’adaptation bioénergétique en situation d’hypoxie ou d’excès de nutriments. Une expression ou une activité dérégulée de PDK2 a été associée à des altérations de la sensibilité à l’insuline, à un remodelage métabolique et à des phénotypes prolifératifs observés dans divers contextes pathologiques, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier les mécanismes de contrôle métabolique.

PDK2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PDK2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PDK2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PDK2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PDK2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.