Plasmide Double Nickase (h) PDE5A: sc-401627-NIC

PDE5A code la phosphodiestérase 5A, une phosphodiestérase spécifique du cGMP qui met fin à la signalisation monoxyde d’azote–cGMP en hydrolysant le GMPc en GMP. En contrôlant les niveaux de GMPc, PDE5A régule l’activité de la protéine kinase G (PKG) et des processus en aval, notamment le tonus du muscle lisse, la réactivité vasculaire, la fonction plaquettaire et les réponses de remodelage cardiaque. L’activité de PDE5A est liée à des réseaux de signalisation qui intègrent la production de la guanylate cyclase avec l’homéostasie du calcium et la dynamique du cytosquelette, influençant la contractilité et la prolifération cellulaires. Une expression dérégulée de PDE5A ou un déséquilibre de sa signalisation a été étudié dans la physiopathologie cardiovasculaire et vasculaire pulmonaire, le remodelage associé à la fibrose, ainsi que dans d’autres contextes où une homéostasie du GMPc altérée contribue à des phénotypes pertinents pour la maladie.

PDE5A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PDE5A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PDE5A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PDE5A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PDE5A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.