Particules Lentivirales d'Activation (m) Pdcd-1: sc-422150-LAC

Le gène murin *Pdcd1* code Pdcd-1 (PD-1), un récepteur inhibiteur de point de contrôle immunitaire induit sur les lymphocytes T activés, les lymphocytes B et des populations myéloïdes, qui freine la signalisation des récepteurs antigéniques afin de maintenir la tolérance périphérique. Lorsqu’il est engagé par PD-L1 ou PD-L2, PD-1 recrute la phosphatase SHP2 pour atténuer la signalisation proximale TCR/CD28 ainsi que les voies PI3K–AKT–mTOR et RAS–MAPK en aval, réduisant la prolifération, la production de cytokines et la capacité métabolique. L’expression de *Pdcd1* est une caractéristique de l’épuisement des lymphocytes T lors d’une exposition antigénique chronique et module la dynamique des centres germinatifs, influençant la régulation immunitaire dans l’infection, l’inflammation et l’échappement immunitaire associé aux tumeurs. Dans les modèles murins, *Pdcd1* est fréquemment étudié pour disséquer la biologie des checkpoints, la différenciation des cellules immunitaires et les mécanismes d’hyporéactivité fonctionnelle.

Les particules d'activation lentivirales Pdcd-1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Pdcd1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Pdcd-1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Pdcd1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Pdcd-1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Pdcd1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.