Plasmide Double Nickase (h) paxillin: sc-416733-NIC

PXN code la paxilline, une protéine adaptatrice multi-domain des adhérences focales qui coordonne la signalisation des intégrines avec le remodelage du cytosquelette d’actine en servant de plateforme d’assemblage pour des kinases et des régulateurs de GTPases aux sites de contact cellule–matrice. Grâce à ses interactions avec FAK/PTK2, les kinases de la famille SRC, CRK et des composants des voies ARF/RHO, la paxilline contribue à réguler le renouvellement des adhérences, l’étalement cellulaire, la migration et la mécanotransduction. PXN participe à des voies reliant les signaux de la matrice extracellulaire aux sorties de signalisation MAPK et PI3K qui influencent les programmes de prolifération et de survie. Des altérations de l’expression, de la phosphorylation ou de la dynamique des adhérences focales de la paxilline ont été associées à des comportements invasifs et à un potentiel métastatique dans de multiples contextes tumoraux, ce qui motive son utilisation dans des modèles de motilité cellulaire et de signalisation dépendante de l’adhérence.

paxillin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PXN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PXN. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PXN. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PXN.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.