Plasmide CRISPR/Cas9 KO paxillin (h): sc-416733

Présentation

PXN code la paxilline, une protéine adaptatrice des adhésions focales qui coordonne la signalisation des intégrines avec le remodelage du cytosquelette d’actine afin de contrôler l’adhérence, l’étalement et la migration cellulaires. La paxilline agit comme échafaudage pour des kinases et des protéines structurales, notamment FAK et SRC, reliant les signaux issus de la matrice extracellulaire à des voies en aval telles que MAPK/ERK et PI3K. En régulant le renouvellement des adhésions focales et la mécanotransduction, la paxilline contribue à des processus tels que la réparation des plaies, le trafic des cellules immunitaires et les réponses cellulaires induites par la matrice extracellulaire. Une signalisation de la paxilline dérégulée et des dynamiques d’adhésion focale altérées sont fréquemment étudiées dans le contexte de modifications de la motilité et de phénotypes d’invasion, pertinents pour la biologie du cancer ainsi que pour des microenvironnements fibreux ou inflammatoires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO paxillin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PXN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PXN, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PXN à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine paxillin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PXN pour l'étude de la signalisation de paxillin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PXN essentiels à la fonction de paxillin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PXN pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le paxillin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le paxillin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PXN. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le paxillin plasmide HDR (h) et le paxillin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PXN pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PXN définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.