Plasmide CRISPR d'Activation (h) Parafibromin: sc-401334-ACT

CDC73 code pour la parafibromine, un suppresseur de tumeur nucléaire qui agit comme composant central du complexe régulateur transcriptionnel PAF1, en coordonnant l’élongation de l’ARN polymérase II et le contrôle des gènes associé à la chromatine. La parafibromine contribue à la régulation épigénétique et au contrôle du cycle cellulaire en modulant les modifications des histones et des programmes transcriptionnels liés à la prolifération et à la différenciation. Par ces fonctions, CDC73 aide à maintenir la stabilité génomique et un niveau de transcription équilibré dans de multiples contextes de signalisation, notamment dans des voies qui recoupent l’expression génique dépendante de Wnt/β-caténine. L’altération de la fonction de CDC73 est associée à des néoplasies endocrines et parathyroïdiennes ainsi qu’à une dérégulation plus large du contrôle de la croissance, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques en biologie du cancer et en régulation transcriptionnelle.

Parafibromin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDC73 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Parafibromin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDC73 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDC73, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Parafibromin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDC73 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Parafibromin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Parafibromin dans les cellules tumorales présentant une expression de CDC73 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.