PAI-2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402054-NIC

SERPINB2はプラスミノーゲン活性化因子阻害因子-2（PAI-2）をコードしており、PAI-2はセリンプロテアーゼ阻害因子として、主にウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（uPA/PLAU）の活性を抑制することで、細胞周囲のタンパク質分解（周細胞性プロテオリシス）や細胞外マトリックスのリモデリングを調節します。PAI-2は、プラスミノーゲン活性化カスケードおよびuPA–uPARシグナル伝達の制御を介して、細胞移動、接着、組織リモデリングといったプログラムに影響を与え、これらは炎症反応や創傷応答の経路とも交差します。SERPINB2は、骨髄系細胞や上皮細胞の環境において、サイトカインやエンドトキシンによって強く誘導されるため、その発現は自然免疫の活性化やマクロファージの分化状態と結び付いています。SERPINB2/PAI-2の活性や発現シグネチャーの異常は、線溶系の変調、慢性炎症、線維化、腫瘍微小環境のダイナミクスの変化と関連づけられており、プロテアーゼのバランスや免疫—間質クロストークの機序解明研究に有用な標的となります。

PAI-2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SERPINB2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SERPINB2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SERPINB2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SERPINB2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。