PAFAH1B3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422104

概要

Pafah1b3 は、血小板活性化因子（platelet-activating factor）および関連する生理活性リン脂質を加水分解する、セリン依存性ホスホリパーゼである触媒サブユニット PAFAH1B3 をコードする。脂質セカンドメッセンジャーを調節することで、PAFAH1B3 は膜恒常性の維持に寄与し、下流の炎症シグナル伝達、ストレス応答、代謝リモデリング経路に影響を及ぼす。PAFAH1B3 活性の変化は、細胞内脂質組成のシフトや増殖関連プログラムの変動と関連づけられており、がん細胞代謝や免疫制御の研究における重要性を支持している。マウスモデルでは、Pafah1b3 はリン脂質分解代謝と、それが組織生理および疾患関連の脂質シグナル伝達に与える影響を解析するための扱いやすい介入点となる。

PAFAH1B3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPafah1b3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Pafah1b3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Pafah1b3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PAFAH1B3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PAFAH1B3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Pafah1b3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PAFAH1B3の機能に不可欠なPafah1b3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Pafah1b3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PAFAH1B3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPAFAH1B3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Pafah1b3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PAFAH1B3 HDRプラスミド（m）および PAFAH1B3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPafah1b3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPafah1b3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。