Plasmide Double Nickase (h) PADI4: sc-402657-NIC

PADI4 code la peptidyl-arginine désiminase 4 (PAD4), une enzyme dépendante du calcium qui catalyse la citrullination des résidus d’arginine des protéines, modifiant leur charge et régulant l’architecture de la chromatine. La citrullination des histones médiée par PAD4 module des programmes transcriptionnels et s’articule avec le contrôle épigénétique de l’expression des gènes inflammatoires, la formation de pièges extracellulaires des neutrophiles (NET) et la signalisation de l’immunité innée. Une activité dérégulée de PADI4 a été associée à l’auto-immunité et à l’inflammation chronique, et des profils de citrullination altérés sont fréquemment étudiés dans la polyarthrite rhumatoïde, le lupus et les microenvironnements immunitaires associés aux tumeurs. Ainsi, PADI4 est largement utilisé dans des études sur la régulation de la chromatine, la biologie des neutrophiles et les réseaux de signalisation pilotés par des modifications post-traductionnelles.

PADI4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PADI4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PADI4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PADI4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PADI4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.