Plasmide CRISPR d'Activation (h) PADI4: sc-402657-ACT

PADI4 code la peptidyl-arginine désiminase 4 (PAD4), une enzyme dépendante du calcium qui convertit des résidus d’arginine en citrulline sur les histones et d’autres substrats, modulant ainsi la structure de la chromatine et les programmes transcriptionnels. Via la citrullination des histones, PADI4 intervient dans la régulation épigénétique de l’expression des gènes inflammatoires, la différenciation des granulocytes et les réponses immunitaires innées, notamment des voies liées à la formation des pièges extracellulaires des neutrophiles (NET). Une activité altérée de PADI4 a été associée à des affections auto-immunes et inflammatoires, et a également été étudiée dans le contexte de la biologie tumorale, où le remodelage épigénétique influence l’état cellulaire. Ces caractéristiques font de PADI4 une cible utile pour étudier la signalisation dépendante de la citrullination et le contrôle transcriptionnel dans des modèles pertinents pour l’immunologie et le cancer.

PADI4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PADI4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PADI4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PADI4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PADI4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PADI4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PADI4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PADI4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PADI4 dans les cellules tumorales présentant une expression de PADI4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.