Plasmide CRISPR d'Activation (h) PADI2: sc-403349-ACT

La peptidyl-arginine déiminase 2 (PADI2) est une enzyme dépendante du calcium qui catalyse la citrullination des résidus d’arginine des protéines, modifiant la charge, la structure et les réseaux d’interactions protéiques. Cette modification post-traductionnelle régule l’accessibilité de la chromatine et l’expression génique via la citrullination des histones, et peut remodeler des protéines du cytosquelette et associées à la myéline, reliant ainsi PADI2 à la différenciation et à la signalisation inflammatoire. L’activité de PADI2 s’inscrit à l’interface de programmes transcriptionnels influencés par des voies induites par les cytokines et a été étudiée dans des contextes de dérégulation épigénétique, de lésions tissulaires à médiation immunitaire et de phénotypes associés aux tumeurs. La citrullination dérégulée et la génération de néoépitopes impliquent PADI2 dans des mécanismes pertinents pour l’auto-immunité et la biologie du cancer, ce qui en fait un nœud moléculaire utile pour l’exploration des voies de signalisation.

PADI2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PADI2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PADI2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PADI2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PADI2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PADI2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PADI2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PADI2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PADI2 dans les cellules tumorales présentant une expression de PADI2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.