Plasmide Double Nickase (h) PACAP: sc-402741-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PACAP correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PACAP Double Nickase (h) et le plasmide PACAP Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ADCYAP1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PACAP Antibody (F-2): sc-166180
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PACAP | sc-402741-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PACAP | sc-402741-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADCYAP1 code le polypeptide activateur de l’adénylate cyclase hypophysaire (PACAP), un neuropeptide qui transmet ses signaux principalement via PAC1 (ADCYAP1R1) et les récepteurs VPAC afin de stimuler l’AMPc/PKA, la voie PLC/Ca²⁺, ainsi que des programmes transcriptionnels en aval régulés par CREB et les MAPK. PACAP module l’excitabilité neuronale, la sécrétion neuroendocrine et les circuits sensibles au stress, et influence également les fonctions immunitaires et vasculaires via une signalisation médiée par des RCPG. Dans des modèles cellulaires, l’activité d’ADCYAP1 s’articule avec des voies contrôlant la plasticité synaptique, l’homéostasie métabolique et le niveau de neuro-inflammation. Une signalisation PACAP dérégulée a été associée à des phénotypes neurologiques et neuropsychiatriques, notamment des altérations du traitement du stress et de la douleur ainsi que des mécanismes liés à la migraine, faisant d’ADCYAP1 une cible pertinente pour des études mécanistiques de la biologie des neuropeptides et des RCPG.
PACAP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ADCYAP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ADCYAP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ADCYAP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ADCYAP1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.