Plasmide CRISPR/Cas9 KO p53R2 (h): sc-402192

Présentation

RRM2B code pour p53R2, une petite sous-unité de la ribonucléotide réductase inductible par p53, qui fournit des désoxyribonucléotides nécessaires à la synthèse et à la réparation de l’ADN, en particulier en conditions de stress. p53R2 participe au maintien de l’ADN mitochondrial et contribue à l’équilibre rédox ainsi qu’à la survie cellulaire lors d’un stress réplicatif, en maintenant les réserves de dNTP. Sur le plan fonctionnel, elle fait le lien entre la réponse aux dommages de l’ADN, la signalisation p53 et le métabolisme des nucléotides, influençant la stabilité du génome et le contrôle des points de contrôle (checkpoints). La dérégulation de RRM2B a été associée à des phénotypes de déplétion de l’ADN mitochondrial et à l’adaptation au stress liée au cancer, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du maintien du génome et du remodelage métabolique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO p53R2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RRM2B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RRM2B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RRM2B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine p53R2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RRM2B pour l'étude de la signalisation de p53R2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RRM2B essentiels à la fonction de p53R2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RRM2B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le p53R2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le p53R2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RRM2B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le p53R2 plasmide HDR (h) et le p53R2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RRM2B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RRM2B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.